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玉叶金花化学成份及抗炎活性药学学习

日期:2020年02月22日 编辑:ad201107111759308692 作者:英超手机买球盘口 论文网 点击次数:983
论文价钱:150元 论文编号:lw202002202332592019 论笔墨数:0 所属栏目:药学论文
论文地域:中国 论文语种:中文 论文用处:硕士毕业论文 Master Thesis

本文是一篇药学论文,笔者以为玉叶金花作为我国一项传统中药,在我国利用时候悠长,同时候布普遍、资本丰硕,国际外学者对玉叶金花的化学成份和药理活性做了学习和报道,证实了玉叶金花水提物具备明显的抗炎、抗菌、镇痛、抗胆碱、抗生养的感化,可是今朝对玉叶金花详细的化学成份的药用机制及药理感化机制学习较少,有待进一步摸索学习。


第一章  玉叶金花中化学成份的学习


1.1 尝试资料、仪器及试剂

1.1.1  质料药材及药材判定

玉叶金花由桂林三金药业股份有限公司供给,经广西食物药品查验所中药室黄清泉主管药师判定为茜草科动物玉叶金花 Mussaenda Pubescens Ait. f.的枯燥根和茎。

1.1.2 尝试仪器

UPLC-MS(Bruker,美国),核磁仪(Varian VNMRS 600MHz,美国),扭转蒸发仪(Heidolph,德国),阐发天平(梅特勒百万分之一,瑞士),制备液相 GX-271(吉尔森,法国),高效液相色谱仪(安捷伦,1260)。

1.1.3 试剂与资料 

色谱柱:Luna  C18、YMC-Pack  C8、SunFire  C18;硅胶(200~300目,国药团体化学试剂有限公司),硅胶 G 板、硅胶 GF254(青岛陆地化工有限公司),MCI(三菱化学 MCI GEL CHP20P 聚苯乙烯型反向树脂填料),大孔树脂 D101,Sephadex  LH-20(GE  Healthcare,  美国),95%产业乙醇,95%乙醇,煤油醚(60-90℃),乙酸乙酯,二氯甲烷,氯仿,丙酮,甲醇,乙腈等试剂(国药团体化学试剂有限公司,阐发纯),甲醇、乙腈(色谱纯)。

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1.2 玉叶金花化学成份的提取与分手

1.2.1  提取分手进程

称取玉叶金花药材粗粉 6.7kg,用 10 倍体积 95%产业乙醇加热回流提取 3 次,每次回流 1h,归并提取液,收受接管乙醇至无醇味。玉叶金花浸膏加水消融浓缩至 4L,别离用煤油醚(60~90°)、乙酸乙酯萃取,收受接管无机试剂,得煤油醚部位(113.0g)和乙酸乙酯部位(120.0g)。乙酸乙酯部位停止进一步分手。

乙酸乙酯部位经由进程硅胶拌样,频频过硅胶柱,以二氯甲烷和甲醇为洗脱剂,梯度洗脱,得 8:1 部位Ⅰ(7.09g)和 4:1:3ml 部位Ⅱ(15.90g)进一步分手。部位Ⅰ硅胶拌样,硅胶柱洗脱,洗脱剂三氯甲烷和甲醇,10:1 洗脱部位进一步 Sephadex LH-20 分手,以二氯甲烷:甲醇(1:1)洗脱,归并不异化合物,进一步经由进程 Sunfire 半制备柱 C18 制备获得化合物1(9.70mg).  部位Ⅱ上样于 MCI 柱,甲醇水体系洗脱,得Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅱ3。Ⅱ1 部位经 GX-271 制备液相、制备柱 Lunna C18 5μm 制备获得Ⅱ1A化合物 2(15.90mg)、Ⅱ1B、Ⅱ1C,Ⅱ1B 制备液相再次制备获得化合物 1(47.15mg)、化合物 3(14.00mg)、化合物 4(4.80mg)、化合物5(26.80mg);Ⅱ1C 半制备 YMC-Pack C8 柱制备获得化合物 6(30.00mg)。Ⅱ2 经由进程 X﹒Bridge  C18  色谱柱制备获得化合物 7(34.00mg)、化合物8(15.10mg)、化合物 9(117.00mg)。Ⅱ3 部位先以甲醇水体系停止ODS 柱分手,再颠末 Sephadex LH-20 柱分手,最初经由进程制备液相制备获得化合物 15(232.00mg)和化合物 10(16.54mg)。

因在对乙酸乙酯部位化合物分手进程中发明咖啡酰奎宁酸类化合物产生甲基化,经由进程 LC-MS 化合物追源发明玉叶金花醇提物中未甲基化的咖啡酰奎宁酸类成份含量较多,故对玉叶金花停止 95%产业乙醇提取分手。玉叶金花乙醇提液,收受接管乙醇,用 80%乙醇静置 12h,滤过,滤液减压至无醇味,加水浓缩 1:1,静置 12h 滤过;提取液大孔树脂 D101 吸附,
顺次用水、15%乙醇、45%乙醇、95%乙醇洗脱。15%乙醇部位顺次颠末MCI 柱,Sephadex LH-20 柱,获得化合物 11(38.90mg);45%乙醇部位甲醇水体系 MCI 色谱柱洗脱,制备液相制备,Sephadex LH-20 柱纯化,获得化合物 12(4.60mg)、化合物 13(24.00mg)、化合物 14(89.00mg)。

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第二章  玉叶金花中 4 种无机酸类化合物的含量测定


2.1 尝试试药、试剂和仪器

2.1.1 试药、试剂

玉叶金花(经广西食物药品查验所中药室黄清泉主管药师判定为茜草科动物玉叶金花 Mussaenda Pubescens Ait. f.的枯燥茎和根),对照品绿原酸(中国食物药品检定学习院,110753-201716,110753-201415,纯度>96.6%)、异绿原酸 A(中国食物药品检定学习院,111782-20170,纯度 >97.3% ) , 异 绿 原 酸 B ( 上 海 安 谱 实 验 科 技 股 份 有 限 公 司 ,CDAA-280180,纯度>98.6%),异绿原酸 C(中国食物药品检定学习院,11884-201102,纯度>94.1%);乙腈为色谱级,甲醇、磷酸为阐发纯,水为高纯水。

2.1.2 仪器

Agilent 1260 infinity 高效液相色谱仪(VWD 检测器、四元恒流泵、在线脱气机、主动进样器,美国安捷伦公司);Agilent 1100 型液相色谱仪(DAD 检测器、四元恒流泵、在线脱气机、主动进样器,美国安捷伦);百万分之一电子天平(瑞士梅特勒-托利多);十万分之一电子天平(瑞士梅特勒-托利多);双频数控超声波洗濯器(昆山市超声仪器有限公司)。

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2.2 外标法测定玉叶金花中绿原酸含量

2.2.1 方式与成果

2.2.1.1 色谱前提

色谱柱 SHISEIDO C18 MGⅡ(5μm,4.6mmL.D.×250mm);柱温30℃;流速:1.0mL/min;活动相:乙腈:0.4%磷酸(9:91)[19];检测波长:327nm。实际塔板数 31883。液相图如图 15。

图 15:玉叶金花腔品及对照品 HPLC

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第三章  玉叶金花中 4 种无机酸类化合物的抗炎活性学习 ...................... 63

3.1  尝试资料与仪器 ................................... 63

3.1.1  尝试资料 ..................................... 63

3.1.2  尝试仪器 .................................. 63

第四章  会商 ...................... 73


第三章  玉叶金花中 4 种无机酸类化合物的抗炎活性学习


3.1  尝试资料与仪器

3.1.1  尝试资料

小鼠 RAW246.7 细胞(由广西西医药大学杨世林团队供给),绿原酸(中国食物药品检定学习,纯度>96.6%)、异绿原酸 A(中国食物药品检定学习院,纯度>97.3%),异绿原酸 B(上海安谱尝试科技股份有限公司,纯度>98.6%),异绿原酸 C(中国食物药品检定学习院,纯度>94.1%),培育基(GIBCO,美国),胎牛血清(GIBCO,,美国),LPS(SIGMA,  067M4006V,美国),MTT(SIGMA,  MKCB8895,  纯度>97.5%,美国),Griess 试剂(SIGMA,美国),EILSA 试剂盒(欣博盛生物科技有限公司),培育瓶(Thermo,美国),离心管,细胞刮,96 孔板,24 孔板,移液管,枪头(10μL, 300μL, 1mL),打针器,微孔滤膜,一次性滴管。

3.1.2  尝试仪器

各规格移液枪(艾本德,德国),酶标仪(BioTek,德国),颠倒显微镜(OLYMPUS,日本),超净台(ATRTECH,日本),离心计心情(湘仪,湖南),培育箱(Thermo,  美国),冰箱(-20°,-80°),水浴锅,灭菌锅。

表 45   LPS 引诱 RAW246.7 细胞 NO 的开释(mean±sd, n=3)

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第四章  会商


1、经由进程接纳硅胶色谱柱、MCI 色谱柱、葡聚糖凝胶色谱柱、制备液相称分手技术方式从玉叶金花平分手获得 15 个化合物,判定此中 14 个化合物的布局,别离为山栀子苷甲酯(shanzhiside methyl ester)(1);schimoside(2),mussaendiside L(3),隐绿原酸甲酯(4-dicaffeoylquinic acid methyl ester)(4),绿原酸甲酯(3-dicaffeoylquinic acid methyl ester)(5),玉叶金花苷酸甲酯(mussaenoside)(6),异绿原酸 B 甲酯(3,4-dicaffeoylquinic  acid  methyl  ester)(7),为异绿原酸 A 甲酯(3,5-dicaffeoylquinic  acid  methyl  ester)(8),异绿原酸 C

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